以PCR产物为模板,只要引物,体系对,怎么P怎么出你的模板就是PCR产物,浓度再低也没事,稀释100倍没问题没什么要注意的;RNA分子怎么能作为PCR模板呢PCR的酶是DNA聚合酶,需要用DNA为模板因此需要mRNA逆转录为cDNA,再以cDNA为模板才能进行PCR反应。
RNA做模板就是所谓的反向PCR了耐高温不是聚合酶的通性,聚合酶一般都不耐高温,所以虽然PCR的思想早就有了,但是因为没有耐高温的聚合酶所以才无法付诸实践,直到后来从水生栖热菌中发现了Taq才使得PCR被广泛使用;1引物和模板在加之前离不离心 跟以后有没有条带没有关系PCR没有条带一般是因为各物质之间的比例或者退火温度不合适,你需要调整和优化每换一种试剂都要重新优化PCR条件2把水bufferDntpmg离子做一个mixture。
你看得那个糊涂蛋的protocol,其实做实验没有那么刻意,能做出结果就是最好的了当然也得注意细节;PCR分开扩增,2者或多者片段大于20bp可以混在一起 3730毛细管电泳可以区分出来。
首先,如果你的引物不存在相互的干扰,那么你可以试着放在一个体系里面做实验其次,引物设计按照标准的方法就可以 最后,实在是要用电泳的方法,并且你的片段大小相差较大的情况下可以使用琼脂糖,什么情况下用聚丙烯酰胺凝胶;在PCR反应中,除了引物和模板,其他的试剂是完全一样的,为了防止在加样的过程中,造成其他试剂的污染,一定是把别的都取出来以后,再加引物,再加模板这样其他人,或者其他样品再用这些试剂的时候,相互污染的可能性小。
pcr技术的模板和原料是什么
1、PCR合成的时候当然不只是需要引物,模板链也就是目的基因片段是必须的因为DNA聚合酶合成DNA时只能从一段已有的DNA片段往上加脱氧核苷酸延伸子链,而不能从头合成,所以需要一段引物引物就是目的基因在5#39段的一小段序列。
2、菌落pcr和菌液pcr在原理和操作方面有什么区别 如果转化成功的话,菌落里的菌就含有你克隆的质粒载体了,用枪头直接碰一下,然后作为PCR模板,就可以进行PCR扩增了但是菌落PCR鉴定的假阳性率其实也不低,所以建议你挑取菌落。
3、原理是提取组织或细胞中的总RNA,以其中的mRNA作为模板,采用OligodT或随机引物利用逆转录酶反转录成cDNA再以cDNA为模板进行PCR扩增,而获得目的基因或检测基因表达该技术主要用于分析基因的转录产物获取目的基因。
4、PCR技术的基本原理类似于DNA的天然复制过程,其特异性依赖于与靶序列两端互补的寡核苷酸引物DNA的半保留复制是生物进化和传代的重要途径双链DNA在多种酶的作用下可以变性解旋成单链,在DNA聚合酶的参与下,根据碱基互补。
5、你好,你要扩增哪里,那里就是你的说的目的片段和基因本身没有什么具体关系可以扩增基因内的一部分序列内含子也好外显子也好内含子+外显子也好,可以扩增基因外的间隔序列,完全是根据实验需要来定的。
pcr技术模板dna的作用
同学,从你问问题的情况我猜想你可能有些基本问题很含糊我试着分析一下1首先PCR是体外大量扩增目的DNA的技术你问模板DNA是什么,这是不需要问的,你想扩增的目的基因是什么什么就是模板你用cDNA来做PCR模板当然是。
引物为人工合成的两段寡核苷酸序列,一个引物与靶区域一端的一条DNA模板链互补,另一个引物与靶区域另一端的另一条DNA模板链互补,其功能是作为核苷酸聚合作用的起始点,核酸聚合酶可由其3端开始合成新的核酸链PCR引物。
PCR即聚合酶链式反应Polymerase chain reaction的缩写,它是体外酶促合成特异DNA片段的方法这一方法的要点是合成两个分别互补于待扩增DNA片段两端的小片段引物,在含有引物待扩增DNA模板核苷酸底物和DNA多聚酶的反应体系。