PCR最有价值的应用领域就是对感染疾病的诊断理论上，只要样本有一个病原体存在，PCR就可以检测到在实验中发现，DNA在高温时也可以发生变性解链，当温度降低后又可以复性成为双链因此，通过温度变化控制DNA的变性和复性；PCR技术的基本原理该技术是在模板DNA引物和四种脱氧核糖核苷酸存在下，依靠于DNA聚合酶的酶促合成反应DNA聚合酶以单链DNA为模板，借助一小段双链DNA来启动合成，通过一个或两个人工合成的寡核苷酸引物与单链DNA模板中；定量PCR的模版既可以使总DNA，也可以是cDNA，但两种做法的用途不同如果用总DNA做模版，你检测的就是总DNA的拷贝数如果以cDNA为模版，你检测的就是某个基因的表达水平。

PCR合成的时候当然不只是需要引物，模板链也就是目的基因片段是必须的因为DNA聚合酶合成DNA时只能从一段已有的DNA片段往上加脱氧核苷酸延伸子链，而不能从头合成，所以需要一段引物引物就是目的基因在5#39段的一小段序列；在实时荧光PCR中模板的定量有2种方法绝对定量和相对定量绝对定量一般通过已知的标准曲线来确定我们所感兴趣基因的拷贝数相对定量指在一定样品中靶序列相对于另一参照序列的量的变化如果你做的是DNA的定量，可以用DNA；6 引物不同体内DNA复制需要RNA，而且体内引物要除去，PCR需要两个人工合成的DNA引物，不需要切除7 PCR对DNA模板要求不高，纯度要求不严格，用量很低，但是引物的设计十分重要，决定了PCR扩增片段的大小和特异性。

第二种从mRNA逆转录获得，在这种情况下，mRNA的cDNA，与原来的基因组DNA相同而且无内含子相反地，对应于在原来基因中没有的而在mRNA存在的3#39末端的poly A序列等的核苷序列上，与外显子序列先导序列以及后续序列等一起；在PCR中底物应该是dNTP，组成DNA的基本单位，而模板链含目标片段，来自于样品应该是要先从样品中提取DNA，然后根据目标片段设计引物，向公司订制引物，然后做PCR我可能不大专业，我了解的就是这些，希望能帮到你；pcr需要的原料有物PCR引物为DNA片段，细胞内DNA复制的引物为一段RNA链酶dNTP模板和缓冲液PCR是利用DNA在体外摄氏95°高温时变性会变成单链，低温经常是60°C左右时引物与单链按碱基互补配对的原则结合；PCR的原理该技术是在模板DNA引物和四种脱氧核糖核苷酸存在下，依赖于DNA聚合酶的酶促合成反应DNA聚合酶以单链DNA为模板，借助一小段双链DNA来启动合成，通过一个或两个人工合成的寡核苷酸引物与单链DNA模板中的一段。

再以cDNA为模板进行PCR扩增，主要是获得目的基因或检测基因表达，判断目的基因mRNA转录水平的相对量的变化因为直接提取DNA的话，并不能证明该基因在其他细胞体内进行表达，通过这种方法可以克服假阳性多聚酶链式反应polymerase；你好，你要扩增哪里，那里就是你的说的目的片段和基因本身没有什么具体关系可以扩增基因内的一部分序列内含子也好外显子也好内含子+外显子也好，可以扩增基因外的间隔序列，完全是根据实验需要来定的；pcr的模板可以是蛋白质PCR模板制备是PCR实验的首要步骤，模板制备是从待分析样本中纯化和浓缩核酸DNA或RNA以作为PCR扩增模板的过程由于PCR用途多样，用于提取核酸的材料可能是全血动植物组织培养细胞口腔涂片体液。

因为pcr利用一种DNA聚合酶来延伸结合在待定序列模板上的引物DNA模板纯度不纯的时候，会对PCR起抑制作用PCR反应中，模板只要1ng就可以，所以模板浓度不要太高直到掺入一种链终止核苷酸为止每一次序列测定由一套四个。

pcr技术的四种原料是dNTP引物模板DNATaq DNA聚合酶引物有多种设计方法，由PCR在实验中的目的决定，但基本原则相同PCR所用的酶主要有两种来源Taq和Pfu，分别来自两种不同的噬热菌其中Taq扩增效率高但易发生错。